如有神“柱”| 寡核苷酸分析利器- BIOshell™ Å120 Oligo C18熔融核色譜柱

時(shí)間：2026-7-6 閱讀：53

寡核苷酸是由2-30個(gè)核苷酸殘基通過磷酸二酯鍵連接而成的短鏈核酸片段，廣泛用于生物治療（包括基因治療、RNA干擾和反義寡核苷酸療法）而備受關(guān)注。這些化合物的治療效果高度依賴其純度和結(jié)構(gòu)完整性，因此建立穩(wěn)健的分析方法對(duì)質(zhì)量控制至關(guān)重要。

HPLC法是監(jiān)控寡核苷酸合成的關(guān)鍵技術(shù)，能為其純度和結(jié)構(gòu)完整性提供有價(jià)值的參考。然而，由于寡核苷酸結(jié)構(gòu)復(fù)雜且存在雜質(zhì)，傳統(tǒng)的HPLC方法在分離寡核苷酸時(shí)面臨挑戰(zhàn)。提高 pH 和溫度的條件會(huì)進(jìn)一步增加分離難度，因?yàn)閭鹘y(tǒng)全孔顆粒（FPP）色譜柱的硅膠填料通常不適合此類條件。

BIOshell^™A120 Oligo C18色譜柱采用熔融核Fused-Core^®顆粒技術(shù)，具有快速、高效的特點(diǎn)。表面改性的有機(jī)硅烷，具有耐堿性，在使用高pH值分離寡核苷酸時(shí)具有優(yōu)異的穩(wěn)定性，這項(xiàng)創(chuàng)新技術(shù)有助于開發(fā)穩(wěn)健的方法，改善堿性化合物的分離效果。堿性化合物在低 pH 條件下通常峰形不佳、保留不足等問題。BIOshell^™色譜柱表面惰性的硬件，很好的解決了樣品吸附問題，可用于生物惰性系統(tǒng)。

BIOshell^™ ?120 Oligo C18色譜柱特點(diǎn)

· 120 ?孔徑：能分離長(zhǎng)達(dá)60個(gè)堿基的寡核苷酸

· 高pH值和高溫條件下出色的穩(wěn)定性：專為分離寡核苷酸而設(shè)計(jì)

· 兼容性：與UHPLC和質(zhì)譜兼容的鍵合相

· 硬件經(jīng)表面惰性處理：最大程度降低樣品吸附

· 鍵合相：表面修飾的二甲基十八烷基硅烷
顆粒大小: 2.7 μm

· 孔徑: 120?

· USP分類: L1

· 碳載量: 5.6%

· 表面積: 75m2/g

· 是否封端: 是

· 柱溫（低pH）: 2/90 °C，柱溫（高pH）: 9/85 °C

對(duì)比實(shí)驗(yàn)

與全多孔色譜柱相比，BIOshell^™ A120 Oligo C18柱在分離寡核苷酸方面表現(xiàn)出更優(yōu)異的性能。如下圖，在高pH條件下，BIOshell^™ A120 Oligo C18和其他供應(yīng)商的寡核苷酸色譜柱分離不同長(zhǎng)度的寡核苷酸混合物。在對(duì)比色譜柱上，由于全多孔色譜柱色譜柱擴(kuò)散路徑增加，全多孔色譜柱峰形較差，20個(gè)堿基及以上的低聚物出現(xiàn)拖尾。由于BIOshell^™ Fused-Core^®顆粒色譜柱的快速和高柱效，相同樣品在BIOshell™色譜柱上無拖尾。

出峰順序：1.10 mer ，2. 15 mer， 3, 20 mer， 4. 25 mer ，5. 30 mer， 6. 40 mer ，7. 50 mer， 8. 60 mer

色譜條件：

色譜柱： BIOshell^™ A120 Oligo C18, 2.7μm, 5 cm x 2.1 mm I.D.( 70003-U)

對(duì)比柱：Oligo 130A C18,1.7um,2.1*50mm

流動(dòng)相A：100mM TEAA, pH 8.5

流動(dòng)相B：乙腈

梯度時(shí)間：

Time	%B
0.0	5
10.0	11
11.0	11
11.5	0
16.5	0

流速：0.5 mL/min

背壓：BIOshell™140 bar, 對(duì)比柱255bar

柱溫：60 °C

進(jìn)樣體積：1.0 μL

樣品溶劑：10mM Tris HCl/1mM EDTA

檢測(cè)波長(zhǎng)：UV/PDA, 254 nm

流通池：1 μL

采集頻率100 Hz

響應(yīng)時(shí)間0.025 s

長(zhǎng)寡核苷酸的分離：

寡核苷酸的分離：從20mer - 到100mer

使用BIOshell^™A120 Oligo C18 INERTProve^™色譜柱可以實(shí)現(xiàn)單鏈DNA（ssDNA）寡聚體的分離。如示例所示，這些色譜柱成功分離100-mer的寡核苷酸，展示了其卓越的精度和效率，以及處理復(fù)雜且長(zhǎng)序列的能力。

分離寡核苷酸混合物

在高pH條件下使用BIOshell^™ A120 Oligo C18色譜柱，可以在5分鐘內(nèi)分離出含有6種不同寡核苷酸的樣品。

出峰順序：1.20 mer， 2. 15 mer ，3.12 mer ，4. 25 mer， 5. 33 mer， 6. 12 mer

色譜條件：

色譜柱：BIOshell^™A120 Oligo C18, 2.7μm, 5 cm x 2.1 mm I.D.（70003-U）

流動(dòng)相A：100mM TEAA, pH 8.5

流動(dòng)相B：乙腈

梯度時(shí)間：

時(shí)間	%B
0	7.5
5	15
5.3	60
5.6	60
8.0	7.5

流速：0.4 mL/min

背壓：142 bar

柱溫：50 °C

進(jìn)樣體積：1 μL of Oligonucleotide Performance Standard Mix, 12-33 NT

樣品溶劑：10mM Tris HCl/1mM EDTA

檢測(cè)波長(zhǎng)：PDA, 254 nm

流通池：1 μL

采集頻率：100 Hz

相應(yīng)時(shí)間：0.05 sec.

分離不同大小寡核苷酸

以下是分離寡核苷酸標(biāo)準(zhǔn)混合物(含有10-60個(gè)ssDNA)的應(yīng)用。使用了乙酸三乙胺(TEAA)和乙腈梯度洗脫。在3.5分鐘內(nèi)，使用BIOshell^™A120 Oligo C18, 2.7μm, 5 cm x 2.1 mm I.D.( 70003-U)，可分離長(zhǎng)達(dá)60個(gè)堿基的寡核苷酸，并獲得優(yōu)異的峰型和分離。